科普:生物樣品液相檢測(cè)的基質(zhì)效應(yīng)如何消除?廣州中森
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  • 在生物樣品(如血漿、尿液)的液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS/MS)檢測(cè)中,基質(zhì)效應(yīng)指樣品中非目標(biāo)組分(如磷脂、鹽類(lèi)、代謝物)干擾目標(biāo)分析物的離子化效率,導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏離真實(shí)值。主要表現(xiàn)為:

    -離子抑制:基質(zhì)組分降低目標(biāo)物離子化效率,使結(jié)果偏低;

    -離子增強(qiáng):少數(shù)情況下導(dǎo)致信號(hào)虛高。

    通用消除與補(bǔ)償策略

    1.樣品前處理優(yōu)化

    -蛋白沉淀(PPT):快速但去除雜質(zhì)不徹底,易殘留磷脂。

    -固相萃?。⊿PE):選擇性吸附目標(biāo)物,顯著降低磷脂干擾。

    -液液萃取(LLE):利用極性差異分離,對(duì)非極性基質(zhì)效果佳。

    2.色譜分離改進(jìn)

    -延長(zhǎng)目標(biāo)物與基質(zhì)組分的保留時(shí)間差,避免共洗脫。

    -優(yōu)化流動(dòng)相(如添加甲酸銨)或色譜柱(親水柱分離磷脂)。

    3.內(nèi)標(biāo)法校正

    -使用穩(wěn)定同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)物(SIL-IS),其理化性質(zhì)與目標(biāo)物一致,可同步經(jīng)歷基質(zhì)效應(yīng),實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)校正。

    4.基質(zhì)匹配校準(zhǔn)曲線

    -用空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)品,模擬實(shí)際樣品環(huán)境,減少定量偏差。

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    廣州中森檢測(cè)的補(bǔ)償方法實(shí)踐

    廣州中森檢測(cè)作為專(zhuān)業(yè)生物分析實(shí)驗(yàn)室,結(jié)合上述策略實(shí)施系統(tǒng)性補(bǔ)償方案:

    1.內(nèi)標(biāo)主導(dǎo)校正

    -優(yōu)先選用同位素內(nèi)標(biāo),尤其對(duì)高靈敏度藥物檢測(cè)(如抗腫瘤藥)。

    2.梯度洗脫優(yōu)化

    -針對(duì)磷脂干擾,調(diào)整梯度程序使磷脂早于目標(biāo)物洗脫(如反相色譜中磷脂保留較弱)。

    3.基質(zhì)效應(yīng)評(píng)估與驗(yàn)證

    -通過(guò)柱后灌注實(shí)驗(yàn)或不同來(lái)源基質(zhì)對(duì)比量化基質(zhì)效應(yīng)(MF值需在85-115%)。

    -若MF值超限,則優(yōu)化前處理(如SPE小柱選擇磷脂特異性吸附劑)。

    4.方法學(xué)驗(yàn)證

    -在驗(yàn)證階段測(cè)試低、中、高濃度基質(zhì)的回收率與精密度,確保補(bǔ)償有效性。

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