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武漢貝科新肽(圖)-植物亞細(xì)胞定位-亞細(xì)胞定位

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洋蔥亞細(xì)胞定位的方法包括但不限于以下三種：

熒光法：利用抗原與的特異性結(jié)合，洋蔥亞細(xì)胞定位培養(yǎng)，在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生熒光標(biāo)記，植物亞細(xì)胞定位，從而確定細(xì)胞內(nèi)抗原的分布位置。

GFP融合蛋白表達(dá)法：將目的蛋白與綠色熒光蛋白(GFP)融合，通過(guò)熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)位置。

亞細(xì)胞分離法：通過(guò)一定的物理或化學(xué)方法，將細(xì)胞進(jìn)行破碎，然后通過(guò)離心、密度梯度離心等方法將細(xì)胞器分離出來(lái)，再對(duì)分離出來(lái)的各個(gè)細(xì)胞器進(jìn)行成分和結(jié)構(gòu)分析。

基因法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞：

分別用70%乙醇和滅菌蒸餾水清洗金粉（直徑為1 μm），加入滅菌蒸餾水制成金粉懸浮液，取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋蔥表皮的玻璃皿中，邊振蕩邊加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP質(zhì)粒，亞細(xì)胞定位公司，逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亞精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2，振蕩混勻?；騁DS-80轟擊時(shí)氦氣罐的氣壓為1 300 psi，取10 μL DNA 包裹好的微粒懸浮液加到基因中央，進(jìn)行轟擊，之后放置25℃避光過(guò)夜培養(yǎng)，使用ConfocalLaser激光共聚焦顯微鏡觀察。

理解復(fù)雜生理過(guò)程：細(xì)胞內(nèi)的各種生理過(guò)程是由不同亞細(xì)胞位置的蛋白質(zhì)協(xié)同作用完成的。亞細(xì)胞定位研究可以幫助我們更好地理解這些復(fù)雜生理過(guò)程的機(jī)制。

設(shè)計(jì)靶標(biāo)：許多的作用靶點(diǎn)是特定亞細(xì)胞位置的蛋白質(zhì)。準(zhǔn)確確定蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位可以為設(shè)計(jì)提供有價(jià)值的靶標(biāo)信息。

亞細(xì)胞定位的研究方法：

融合報(bào)告基因定位法：將待研究的蛋白質(zhì)與報(bào)告基因融合，通過(guò)觀察報(bào)告基因的表達(dá)位置來(lái)確定蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位。常用的報(bào)告基因有綠色熒光蛋白（GFP）等。

免疫組織化學(xué)定位法：利用特異性與蛋白質(zhì)結(jié)合，亞細(xì)胞定位，通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的位置。

蛋白質(zhì)組學(xué)定位技術(shù)：通過(guò)對(duì)細(xì)胞內(nèi)不同亞細(xì)胞組分的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離和鑒定，確定蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位。

共分離標(biāo)記酶輔助定位法：利用與特定亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)相關(guān)的標(biāo)記酶，通過(guò)共分離實(shí)驗(yàn)確定蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位。

生物信息學(xué)預(yù)測(cè)：基于蛋白質(zhì)的氨基酸序列等信息，利用計(jì)算機(jī)算法預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位。

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